猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析

• 作者: 张毅 张涵淞 扈鸿霞 方维焕 李肖梁 温贵兰 王晓杜 章先
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白Nsp2 表达与剪切方式
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1109-1116
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.07.016

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达.构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体.将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品.免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达.筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析.重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50 ku的蛋白条带.PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质.病毒感染8h,可检测到120 ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50 ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多.PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础.