应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫H11基因研究

• 作者: 何延华 张平 王新华 薄新文 陈南颍 韩猛立
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 捻转血矛线虫 H11基因 RNAi 浸泡
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 744-752
• 页数: 9页
• 分类号: S852.16
• 字数: 5132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2013.04.023

摘要

[目的]为了检测RNAi沉默H11基因能否模拟H11疫苗免疫效果.[方法]针对H11基因序列设计并合成特异性dsRNA,通过浸泡方式分别将dsRNA导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析H11基因在L3期幼虫中的转录抑制效果,同时,将H11-dsRNA浸泡L3期幼虫24 h后感染绵羊,定期采集绵羊粪便检查虫卵数,第30 d后剖检绵羊皱胃,检查荷虫数的变化.研究H11基因的沉默对捻转血矛线虫减虫率和减卵率的疫苗免疫效果.[结果]实时荧光定量PCR检测表明:试验组中H11基因的相对含量显著低于对照组(P＜0.01),在浸泡72 h后,H11-dsRNA组基因的表达量仅为对照组的21.33％.绵羊体内干扰沉默效果显示,试验组H11干扰组虫卵减少率为41.02％,减虫率为39.6％.[结论]研究通过浸泡法导入的dsRNA能有效抑制H11基因的转录,同时H11基因的沉默与幼虫的发育密切相关,为捻转血矛线虫及其它寄生线虫的基因功能研究提供一种新的方法.