摘要:
目的:探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)功能的影响及机制.方法:取原代培养小鼠皮层神经元,通过应用钙影像、全细胞膜片钳、免疫荧光和Western Blot等技术,分别观察PKA 激动剂和抑制剂对ASICs 功能的影响及机制.结果:(1)在给予PKA 激动剂或抑制剂前神经元ASICs 电流幅值约为(224.2±17.59) pA(n=15),预孵育PKA 激动剂forskolin(10 μmol/L)使电流幅值减小为(108±14.67) pA(n=9),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而预孵育PKA 抑制剂PKAI(5 μmol/L)则使电流幅值增加为(306.3±22.9) pA(n=12),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(2)在给予PKA 激动剂或抑制剂前,酸诱导的胞内钙△F/F值为(0.708±0.07)(n=20),PKA 激动剂forskolin(10 μmol/L)使其减少为(0.140±0.013)(n=17),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),PKA 抑制剂PKAI(5 μmol/L)使其增加为(0.978±0.108)(n=19),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(3)在加入forskolin 或PKAI 24 h 后,神经元ASIC1 总荧光密度无明显改变(P>0.05),但神经元ASIC1 膜荧光密度从对照组的(78.58±7.42)(n=32)减少到forskolin 孵育后的(31.41±3.38)(n=57),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而PKAI 孵育后神经元ASIC1 膜荧光密度增加到(118.29±11.50)(n=34),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论:PKA 通过影响ASICs 膜分布负性调节小鼠皮层神经元ASICs 电流及由酸诱导的胞内钙增加.