Bloom解旋酶突变体的克隆与表达

• 作者: 张金彪 李坤 许厚强 许庆贺 陈祥 骆衡
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: BLM解旋酶 重组PCR 多位点突变 基因克隆表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 123-128
• 语种: 中文

摘要

blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症.临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变.运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中进行表达.分离纯化获得了高纯度(＞95％)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定.这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础.