氩氦冷冻胶质瘤细胞致敏树突状细胞诱导肿瘤杀伤效应的实验研究

• 作者: 何骁征 刘天助 卢国辉 张世忠 林春南 殷志林 王其福 肖振勇
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 氩氦冷冻 神经胶质瘤 树突状细胞 细胞毒性T细胞
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 神经胶质瘤专题
• 页码范围: 1228-1233
• 页数: 6页
• 分类号: R730.264
• 字数: 4528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2013.12.010

摘要

目的 探讨氩氦冷冻胶质瘤细胞冻融产物对C57BL/6小鼠骨髓源树突状细胞(DCs)成熟的影响,以及致敏DCs诱导肿瘤杀伤效应的作用机制. 方法 采用氩氦冷冻法冻融GL261胶质瘤细胞为实验组,只插入探针不冷冻为阴性对照组,冻融等量PBS为空白对照组,采用BCA法测定冻融产物蛋白浓度;体外诱导小鼠骨髓细胞为DCs,加入各组冻融产物后观察其形态学变化.流式细胞仪检测DCs表面CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达.ELISA检测其上清液中IL-12p70的含量;提取小鼠脾脏T细胞,与各组抗原致敏的DCs共培养后活化,流式细胞仪检测活化T细胞CD3、CD4、CD8的表达;以GL261细胞为靶细胞,以活化的T细胞即细胞毒性T细胞(CTLs)作为效应细胞,效靶比分别为10:1、50:1和100:1时CCK-8法检测CTLs对GL261的杀伤率. 结果 实验组冻融产物即肿瘤抗原浓度[(1071 ±240.94)μg/mL]高于阴性对照组[(91.42±55.75)μg/mL]及空白对照组(0μg/mL),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组DCs有典型成熟DCs形态,表型CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达率及IL-12p70分泌量高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组CD8+T细胞表达率高,CD4+T细胞表达率低,与阴性对照组及空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);不同效靶比时实验组CTLs对GL261细胞的杀伤率显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 氩氦冷冻胶质瘤细胞可获取大量肿瘤抗原并促进DCs成熟,冻融产物致敏DCs后可有效负载肿瘤抗原产生抗肿瘤效应,其机制与DCs表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达上调并诱导T细胞转化为CTLs有关.