PCR-RFLP联合AS-PCR检测bcr/abl融合基因T315I突变方法的建立

• 作者: 万腊根 刘淑媛 张长林 徐群飞 杨江慧 江梅 石淙 简正伟 闻芳
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 聚合酶链反应 多态性,限制性片段长度 融合蛋白质类,bcr-abl
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 823-827
• 页数: 5页
• 字数: 3708字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.09.011

摘要

目的 建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)联合等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测bcr/abl融合基因T315I点突变的方法,以提高bcr/abl基因T315I突变检出率.方法 方法学建立.构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象,设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物,分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板,PCR扩增出目的片段,经酶切初筛检测abl基因T315I突变情况,另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物进行AS-PCR检测.并对具有该基因突变的1例慢性粒细胞白血病患者进行检测,同时对该方法的灵敏度和特异性进行检测.结果 PCR扩增的目的片段(273 bp)经限制性内切酶Dde Ⅰ酶切后,野生型abl基因片段产生141、68、46和18 bp4条片段,而T315I突变型abl基因片段酶切后产生159、68和46 bp3条片段.PCR-RFLP方法可以检测T315I突变,检测灵敏度为6％.再以酶切产物作为模板进行AS-PCR,优化反应条件,AS-PCR所能检测到的T315I最低突变浓度为0.18％.所测临床标本结果显示,该患者发生了bcr/abl融合基因T315I突变.结论 PCR-RFLP联合AS-PCR检测方法特异性好、灵敏度高,能够给临床检测abl基因T315I突变提供一种新型的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万腊根	南昌大学第一附属医院检验科	123	328	10.0	13.0
2	简正伟	南昌大学第一附属医院检验科	12	7	2.0	2.0
3	张长林	南昌大学第一附属医院检验科	30	34	3.0	5.0
4	闻芳	南昌大学第一附属医院检验科	11	12	2.0	3.0
5	石淙	南昌大学第一附属医院检验科	10	7	2.0	2.0
6	江梅	南昌大学第一附属医院检验科	19	25	2.0	5.0
7	刘淑媛	南昌大学第一附属医院检验科	12	10	2.0	2.0
8	徐群飞	南昌大学第一附属医院检验科	8	46	4.0	6.0
9	杨江慧	南昌大学第一附属医院检验科	1	2	1.0	1.0