联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原

• 作者: 侯利平 傅海媛 夏云飞 孙云波 宋纯艳 杨保安 陶亚岚 韩治国 黄亚娟
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: 多肽偶联 碳二亚胺偶联法 监测 抗体
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 783-788
• 页数: 6页
• 分类号: O657.77|O629.7
• 字数: 4275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2013.07.001

摘要

建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备.以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件.加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9％～20％之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原.用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万.所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率.