CX26/CX32缝隙连接蛋白的Tet-on HeLa细胞模型的建立及鉴定

• 作者: 吴穷 杨燕 汪子书 汪蕊 王俊斌 郑荣生 陶亮
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞缝隙连接 CX26/CX32 Tet-on调控系统 HeLa细胞 诱导表达
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1079-1084
• 页数: 6页
• 分类号: R-331
• 字数: 3713字
• 语种: 中文

摘要

目的 体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接(GJ)作用的特异性细胞模型,为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段.方法 构建同时双向表达2种不同连接蛋白(CXs)的质粒;用表达CX26/CX32的质粒转染Tet-on HeLa细胞,建立稳定表达CX26/CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型.设置多西环素(Dox)(1μg/mL)处理组和未处理组,分别用RT-PCR和Western blot法检测细胞CX26 mRNA和蛋白质表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能;丽丝胺罗丹明B(SRB)法检测细胞的增殖.在上述细胞模型上,用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)和GJ激活剂维甲酸(RA)干预.结果 HeLa细胞无内源性CX的表达,Dox可诱导Tet-on HeLa细胞CX26 mRNA和蛋白质表达,并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ.2-APB(50 μmol/L)减少稳定表达CX26/Cx32的HeLa细胞间的荧光传递数目,GJ抑制率为51.3％ (P ＜0.01);RA(10 μmol/L)增多细胞间的荧光传递数目,GJ增强率为60.3％ (P ＜0.01).结论 成功建立Dox调控的、稳定表达CX26/Cx32的Tet-on HeLa细胞模型,为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪子书	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	28	113	5.0	9.0
2	吴穷	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	41	273	9.0	14.0
3	郑荣生	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	43	235	9.0	13.0
4	陶亮	中山大学中山医学院药理学教研室	30	172	9.0	12.0
5	王俊斌	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	21	103	5.0	9.0
6	杨燕	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	19	106	5.0	9.0
7	汪蕊	蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科	16	92	6.0	8.0