农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定

• 作者: 张清明 李保华 李桂舫 王彩霞 王海艳 董向丽
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 苹果炭疽病菌 遗传转化 转化子鉴定 致病性
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 1799-1807
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.007

摘要

[目的]优化农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的技术体系,并对转化子进行筛选鉴定,比较其生物学特性和致病性差异.[方法]以苹果炭疽病菌LXS010101分生孢子为转化受体,利用携带重组双元载体的农杆菌进行转化;对获得的转化子进行遗传稳定性测定、PCR检测及Southern blot分析;选取一定数量的转化子,比较其菌落形态、生长速率及分生孢子发育等主要生物学性状及致病性的差异.[结果]苹果炭疽病菌的最优转化体系为:病菌分生孢子悬浮液浓度1 ×105个/mL,共培养温度和时间分别为22℃和24 h,共培养基中添加200μmol·mL-1乙酰丁香酮,其转化效率达到1×105个孢子可获得439个转化子.随机选取30个转化子进行鉴定,发现T-DNA已整合进炭疽病菌基因组中,在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合,且能够稳定遗传.与野生型菌株相比,转化子的菌落形态没有发生明显变化,但23.33％的菌株生长速率显著减低;转化子ATJ-3和ATJ-15不能产生分生孢子,在28个产孢菌株中,分生孢子萌发率显著减低的菌株占39.29％,附着胞形成比例显著减低和形态异常的菌株占25.00％.致病性测定结果显示,11个转化子的致病力显著降低,其中菌株ATJ-19完全丧失致病能力.[结论]优化的苹果炭疽病菌遗传转化技术体系,可用于炭疽病菌致病相关基因的克隆及致病分子机理的研究.