实时荧光定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中Th1/Th2型细胞因子转录水平方法的建立及初步应用

• 作者: 丁铲 刘海文 单雪芹 周锦萍 宋军 张敏 潘玲 田明星 韩先干
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Th1/Th2型细胞因子 巨噬细胞RAW264.7 实时荧光定量PCR 布鲁氏菌
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 430-433
• 分类号: R392.11|R378.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立小鼠RAW264.7巨噬细胞的Th1和Th2型细胞因子荧光定量PCR检测方法.方法 依据GenBank中小鼠的β-actin基因序列、Th1型及Th2型细胞因子的核苷酸序列设计特异性引物,以RAW264.7巨噬细胞mRNA反转录后的cDNA为模板,通过构建质粒阳性标准品,建立检测上述细胞因子转录水平的real-time PCR方法.结果 用建立的荧光定量PCR方法,检测牛型布鲁氏菌S2308株感染RAW264.7巨噬细胞后,巨噬细胞Th1和Th2型细胞因子的转录水平.最低检测量为102拷贝/μL,线性关系很好,R2≥0.982,该方法具有良好的特异性和重复性.结论 成功建立了检测巨噬细胞中Th1和Th2型细胞因子转录水平的荧光定量PCR方法.