人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建

• 作者: 刘双信 史伟 徐丽霞 李东风 梁馨苓 胡鹏华 蒋芬 谢红萍 陈源汉
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 凋亡样坏死 肾小管上皮细胞 微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ Necrostatin-1
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 2302-2305
• 页数: 4页
• 分类号: R692.5
• 字数: 2640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.12.032

摘要

目的:以体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)为靶细胞,构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死(necroptosis)的模型.方法:采用肿瘤坏死因子α(tumor nercosis factor α,TNF-α)诱导细胞凋亡,同时采用抗霉素A(antimycin A)耗竭ATP,构建肾小管上皮细胞凋亡的模型,并以caspase-8抑制剂苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮(benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone,zVAD-fmk)阻断凋亡,用necroptosis的特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)阻断necroptosis,观察细胞在不同的处理下形态学的变化,同时检测细胞存活率及标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达.结果:(1)在TNF-α+zVAD- fmk+antimycin A处理1 h时细胞及细胞器膨胀,电镜下细胞膜碎裂,线粒体变圆、肿胀,嵴逐渐模糊,胞浆中出现大量自噬小体,而Nec-1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善.(2)在TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A 1 h实验组,Nec-1预处理后细胞的存活率显著增加(P<0.05).(3)TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A干预1 h实验组在Nec-1预处理后LC3-Ⅱ的表达量明显下降(P<0.05).结论:凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞necroptosis,抑制剂Nec-1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死.