改良重叠区扩增法构建Rac1相关质粒

• 作者: 段桂华 沈姗姗 诸葛宇征
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: Rac1 重叠区扩增法 基因定点突变 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 177-182
• 语种: 中文

摘要

采用改良重叠区扩增法实现Rac1基因定点突变,构建人Rac1基因相关真核表达质粒,观察EGFP-Rac1融合蛋白在人正常肝细胞LO2中的表达.利用RT-PCR的方法得到Rac1基因,使用改良重叠区扩增法实现Rac1基因的定点突变,获得R ac1突变基因.将Rac1基因及Rac1突变基因通过限制性酶切技术及DNA连接技术插入真核表达载体pEGFP-C1中,获得重组质粒pEGFP-C1-Rac1,pEGFP-C1-Rac1V12和pEGFP-C1-Rac1N17.将上述质粒瞬时转染入LO2细胞中,采用荧光技术及Westernblotting检测目的基因的表达.结果显示,限制性酶切及基因测序证实质粒构建正确,转染LO2细胞后,融合蛋白EGFP-Rac1在细胞中高效表达.成功构建真核表达质粒,在LO2细胞中,该质粒能成功表达融合蛋白EGFP-Rac1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	诸葛宇征	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	57	275	10.0	13.0
2	段桂华	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	1	1	1.0	1.0
3	沈姗姗	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	1	1	1.0	1.0