共表达人PUMA和HGF/NK4基因的重组腺病毒的制备及在胰腺癌细胞中的表达

• 作者: 孔冠群 李二毛 黄志平 黄柏强
• 来源期刊: 国际医药卫生导报
• 关键词: 腺病毒 NK4 PUMA 胰腺癌
• 年，卷（期）: 2013,（16）
• 所属期刊栏目: 科研课题
• 页码范围: 2474-2478
• 页数: 5页
• 字数: 3308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2013.16.009

摘要

目的 制备同步表达HGF/NK4基因和PUMA基因的重组腺病毒,感染胰腺癌细胞后检测基因的有效表达.方法 将PUMA基因和HGF/NK4基因以串联方式依次克隆至腺病毒穿梭载体,构建重组穿梭载体pAdTrack-PUMA-NK4,转化大肠杆菌BJ5183并在细菌内与腺病毒载体同源重组制备重组腺病毒载体pAd-PUMA-NK4.PacⅠ酶切后转染至HEK293细胞包装得到重组腺病毒.一定滴度的腺病毒感染人胰腺癌细胞株,荧光定量RT-PCR检测细胞中NK4和PUMA基因mRNA表达水平.结果 双酶切重组pAd-PUMA-NK4穿梭载体鉴定证实目的基因PUMA和HGF/NK4正确克隆；重组腺病毒载体经PacⅠ酶切得到特异的酶切产物转染HEK293细胞后成功包装出重组腺病毒；病毒感染胰腺癌细胞后3～9d内PUMA和NK4基因的表达水平较高,整体持续表达可维持2w.结论 成功构建了同时表达NK4和PUMA基因的重组腺病毒载体并包装出相应的重组腺病毒颗粒,该腺病毒能有效感染胰腺癌细胞并高表达NK4和PUMA基因,这为进一步确定NK4和PUMA基因的功能及指导双基因联合治疗胰腺癌提供了理论依据和必要的材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李二毛	广州医科大学实验医学研究中心	3	2	1.0	1.0
2	黄柏强		5	0	0.0	0.0
3	黄志平		4	2	1.0	1.0
4	孔冠群		7	78	5.0	7.0