NK4基因重组慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达

• 作者: 尹元琴 李松林 李霏
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: NK4 慢病毒载体 人高侵袭转移肝癌细胞LM3 基因转染
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1081-1084
• 分类号: R73
• 字数: 3053字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20111226.1615.028

摘要

目的 构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况.方法 采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLemi6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度.以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率.Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平.结果 成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3 -NK4 -IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL.重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7.转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达.结论 成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹元琴	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	31	178	8.0	12.0
2	李松林	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	7	31	3.0	5.0
3	李霏	中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所	3	11	2.0	3.0