携带小鼠KLF4基因重组慢病毒的构建及对RAW264.7细胞增殖的影响

• 作者: 向国安 姬文婕 李鑫 杨红艳 梁婧 王如刚 罗虎 蔡卫红
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: Krüppel样转录因子类 慢病毒感染 遗传载体 细胞周期 细胞增殖 Krüppel样因子4
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20170967

摘要

目的 构建小鼠Krüppel样因子4(KLF4)慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞株.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因KLF4后,构建重组质粒pLVX-KLF4,并通过PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定.重组质粒与pSPAX2、pMD2.G辅助质粒通过Lipofectamine?3000共转染293T细胞,包装病毒并测定病毒滴度.将获得的慢病毒感染RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测KLF4 mRNA的表达.分选流式细胞仪分选GFP阳性RAW264.7细胞.流式细胞术检测KLF4对RAW264.7细胞周期的影响.EdU法检测KLF4对RAW264.7细胞增殖的影响.结果 经PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠KLF4基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR证实Lenti-KLF4感染的RAW264.7细胞中KLF4 mRNA表达高于未感染的对照组RAW264.7细胞(P<0.05).初次浓缩后测定小鼠KLF4基因重组慢病毒的滴度为2.05×108 TU/mL.分选出KLF4过表达的RAW264.7细胞.KLF4过表达的RAW264.7细胞周期变化显示为S期延长,G0/G1期缩短.EdU检测显示KLF4过表达的RAW264.7细胞增殖活性增高.结论 成功构建了KLF4的慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达的RAW264.7细胞株,KLF4过表达促进了RAW264.7细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李鑫	中国人民武装警察部队总医院急诊科	52	142	7.0	10.0
2	向国安	中国人民武装警察部队总医院呼吸科	2	3	1.0	1.0
3	姬文婕		1	1	1.0	1.0