IRF5基因慢病毒表达载体的构建及其在巨噬细胞RAW264.7中的表达

• 作者: 华兴 韦建瑞 麦莉
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 干扰素调节因子5 慢病毒表达载体 动脉粥样硬化 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 452-456
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160307

摘要

目的:构建干扰素凋节因子5 (IRF5)慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5并转染巨噬细胞RAW264.7,观察IRF5巨噬细胞RAW264.7中的表达.方法:采用基因重组技术,将PCR技术钓取的目的基因IRF5片段克隆至线性化慢病毒表达载体LV11中,重组载体经PCR、双酶切和测序鉴定构建成功后,采用脂质体转染技术将表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带IRF5基因的重组慢病毒;收集病毒上清液感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用G418将非浸染的细胞致死,获得纯净的浸染细胞,即RAW264.7-IRF5细胞(实验组),并将RAW264.7-NC细胞作为对照(对照组).分别采用RT-qPCR和Western blotting法检测2组细胞中IRF5 mRNA和蛋白的表达水平.结果:重组慢病毒质粒LV11-cmv-neo-IRF5经PCR和酶切法鉴定构建成功;病毒上清液感染RAW264.7细胞并经G418筛选获得阳性细胞;RT-qPCR法检测,与对照组比较,实验组细胞中IRF5 mRNA表达水平升高(P＜0.001);Western blotting法检测,实验组细胞中1RF5蛋白的表达水平明显高于对照组.结论:成功构建携带IRF5基因的慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5,IRF5基因在巨噬细胞RAW264.7中稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦建瑞	暨南大学医学院附属广州红十字会医院心血管内科	22	105	6.0	8.0
2	华兴	暨南大学医学院附属广州红十字会医院病理科	13	39	4.0	5.0
3	麦莉	暨南大学医学院附属广州红十字会医院心血管内科	1	0	0.0	0.0