5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达的初步研究

• 作者: 吴红联 张梅英 王惟 王禄增
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 5-脂氧化酶 基因克隆 真核表达 RAW264.7细胞
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 246-250
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3268字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2010.04.003

摘要

目的 构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264.7细胞中的表达,为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体.方法 从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增5-LO基因,分别构建5-LO目的 基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,进行酶切、PCR和DNA测序鉴定,将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264.7细胞,RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况.结果 构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO,经酶切、PCR及测序鉴定正确:转染细胞后,在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达,RT-PCR和Western blot结果表明转染pEGFP-5-LO的RAW264.7细胞中有5-LO的表达.结论 成功克隆了5-LO基因,构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264.7细胞中表达5-LO蛋白,为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王禄增	中国医科大学实验动物部	73	713	14.0	23.0
2	吴红联	中国医科大学实验动物部	3	12	2.0	3.0
3	张梅英	中国医科大学实验动物部	41	186	7.0	12.0
4	王惟	中国医科大学实验动物部	15	25	3.0	4.0