小鼠Dishevelled2表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

• 作者: 毛英杰 谷志远 赵鹃 黄旭
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Dishevelled 2 表达质粒 RAW264.7细胞 破骨细胞
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 306-309,313
• 分类号: R782.2
• 字数: 3967字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2011.03.022

摘要

目的 构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础.方法 根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,提取RAW264.7细胞总RNA,以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框(ORF),并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上,酶切电泳,测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒.用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察转染效果,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况.结果 成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体,酶切电泳和测序结果 与目的 基因相符;转染RAW264.7细胞后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达.结论 成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2,瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄旭	浙江大学医学院附属第一医院口腔科	22	144	7.0	11.0
2	赵鹃	浙江大学医学院附属口腔医院修复科	13	49	5.0	6.0
3	谷志远	浙江大学医学院附属口腔医院颌面外科	97	585	11.0	18.0
4	毛英杰	浙江大学医学院附属口腔医院颌面外科	13	82	5.0	9.0