RYBP慢病毒表达载体的构建及对结肠癌细胞HCT116增殖的影响

• 作者: 陈等 陈虹 马雯 黄秉仁
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: RYBP 慢病毒载体 HCT116 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 字数: 3608字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP,包装慢病毒颗粒并感染结肠癌细胞HCT116,分析RYBP的表达及对HCT116细胞增殖的影响.方法 用DNA克隆技术在慢病毒表达载体pWPI-IRES-EGFP序列中引入Flag标签及多个单酶切位点序列,改造后的载体命名为pWPI-linker.采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从肝癌SK-Hep-1细胞总RNA中扩增RYBP的全长开放阅读框序列,克隆人pWPI-linker载体中,得到pWPI-RYBP.利用人胚肾细胞HEK293T包装重组慢病毒颗粒,分析该慢病毒颗粒感染HCT116细胞的效率、RYBP蛋白的表达,用MTS方法分析RYBP过表达对HCT116细胞增殖的影响.结果 用改造的pWPI-linker载体成功构建慢病毒表达载体pWPI-RYBP包装的慢病毒颗粒能高效感染HCT116细胞,表达出Flag-RYBP融合蛋白.MTS方法分析表明,RYBP的过表达抑制HCT116细胞的增殖,增殖抑制率达26.1％.结论 改建的慢病毒表达载体pWPI-linker带有可供选择的多个单克隆位点和标签蛋白序列,为今后基于pWPI载体的克隆构建和表达蛋白质的分析提供了极大的便利；RYBP慢病毒表达载体pWPI-RYBP的构建为进一步研究RYBP的生物学功能及基因治疗奠定了基础.