微流控电融合芯片的研制及其在体细胞重编程中的应用

• 作者: 吴畏 屈娅 张小玲 徐海伟 胡宁 阴正勤
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 电融合 体细胞重编程 微流控芯片 胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 分类号: Q319|R394-33|R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 开发高通量的细胞电融合平台,并通过此平台将小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)与体细胞融合,探讨融合细胞的多能性.方法 本实验室自主研发微流控芯片,将转染了绿色荧光的mESCs与转染了红色荧光的NIH3T3细胞进行电融合,并计算其排队率与融合率.通过流式细胞仪筛选出表达两种荧光的融合细胞,观察融合细胞的表型.RT-PCR检测NIH3T3、mESC以及融合细胞的多能性基因(Nanog、OCT4、SOX2和LIN28)mRNA的表达水平.结果 自主研发了微流控芯片,构建了高通量的细胞电融合平台,通过此平台将mESCs与NIH3T3进行电融合,其排队率为(44.35±10.99)％,融合率为(59.88±20.03)％,融合细胞可形成类似于ESC样的克隆.RT-PCR法结果显示mESC和融合细胞均表达多能性基因Nanog、OCT4、SOX2和LIN28 mRNA,而NIH3T3不表达.结论 通过自主研发的微流控芯片,可实现mESCs与NIH3T3的高效融合,使体细胞重编程为多能性干细胞.