猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用

• 作者: 何颖 刘磊 卢冰霞 李斌 梁家幸 秦毅斌 赵武 郭旋 黎木兰
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性乙型脑炎病毒 RT-LAMP 敏感性 特异性
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 动物科学·饲料科学
• 页码范围: 5359-5361,5365
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3499字
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化.[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg；特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应.与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9％.反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间.该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法.[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用.