实时定量PCR检测肺炎支原体2063位点点突变的方法学研究

• 作者: 姜越 孙岚 李丹 李静宜 田秀君 秦选光 董艳青 辛德莉
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 支原体,肺炎 大环内酯类 抗药性,微生物 聚合酶链反应 点突变
• 年，卷（期）: 2013,（32）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 3774-3777
• 页数: 4页
• 分类号: R375.2|R725.631.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2013.11.039

摘要

背景肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎的主要病原体,对目前常用治疗药物--大环内酯类抗生素的耐药率有升高趋势,而传统检测MP耐药株的方法耗时耗力.目的 建立一种快速诊断MP感染及耐药表型的新方法.方法 采用实时荧光定量PCR技术,以23S rRNA为靶序列,设计不同基因型探针及引物,构建阳性质粒,建立标准曲线.结果 实时荧光定量PCR检测敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的下限分别为6和60拷贝数,特异性实验结果显示,仅生殖支原体出现扩增.与23S rRNA巢式PCR测序结果相比,实时荧光定量PCR鉴定43株MP临床分离株2063位点等位基因的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%.12份鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR MP阳性检出率为10/12,耐药率为4/12,1份标本同时发现2063A和2063G位点.结论 本研究初步建立了一种快速诊断MP感染并判断其耐药基因型的实时荧光定量PCR方法,具有较高的灵敏度.