重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

• 作者: 孙华 张自德 江仁望 王峰
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 过氧化氢酶 表达纯化 过氧化氢酶活性 DNA损伤保护 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 药学
• 页码范围: 186-191,195
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5027字
• 语种: 中文

摘要

为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况，构建人过氧化氢酶的原核表达载体，在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶，并进行活性检测．我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体 pET-15b-hCAT，将其转化大肠杆菌Rosetta-gami，经过IPTG诱导，表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化，用试剂盒检测重组hCAT酶活性，然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用．通过荧光定量PCR（qPCR）测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况．本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体，SDS-PAGE检测结果表明，IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白，该蛋白主要以可溶的形式存在，活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg，pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用．qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞．成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体，利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达，纯化的rhCAT具有活性，hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞．这为后续功能研究及性质实验奠定了基础．

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王峰	暨南大学药学院	33	133	7.0	10.0
5	张自德	暨南大学药学院	4	15	2.0	3.0
6	江仁望	暨南大学药学院	30	171	9.0	11.0
10	孙华	暨南大学药学院	2	3	1.0	1.0