饮用水中大肠埃希菌富集和DNA提取方法优化

• 作者: 傅春玲 张宏斌 胡朝友
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠埃希菌 细菌富集 DNA提取 饮用水 食品安全 食源性致病菌
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法
• 页码范围: 36-39
• 分类号: R155.5|R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测.方法 膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取.所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度.结果 采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法(C法),洗脱效率能达到75％～93％;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度(100 ～ 10-5),r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX-100法更省时,更简便,经济性更好.采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7％ ～ 104.0％且灵敏度达到1 cfu/ml.结论 C法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅春玲		55	394	13.0	17.0