大鼠肝细胞系BRL-3A细胞Hsp70过表达条件的优化

• 作者: 孔凡志 杨焕民 王建发 耿仁德 臧琳 薛琳琳 计红 郭景茹 齐艳萍
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 热休克蛋白70(Hsp70) BRL-3A细胞 大鼠 过表达 腺病毒
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 34-38,209
• 页数: 6页
• 分类号: S858.91
• 语种: 中文

摘要

为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在BRL-3A细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染BRL-3A细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×10 7,2×107,1×107,0.5 ×107,0.25×107 pfu/mL)和时间(24h和48 h)感染BRL-3A细胞,优化Hsp70重组腺病毒感染BRL-3A细胞的条件,并应用荧光定量RT-PCR和免疫蛋白印记方法检测Hsp70的mRNA和蛋白表达量.结果表明:当用1×107 pfu/mL病毒Ad-CMV-Hsp70按照最佳感染条件的感染复数(MOI)=20感染BRL-3A细胞48 h时,能使Hsp70表达量比病毒空载体感染细胞和无病毒的对照组细胞极显著升高(P＜0.01).