用一种新方法检测尼古丁减轻鱼藤酮对UPS的毒性

• 作者: 刘洁 屈秋民 石婕 邓永宁
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 泛素-蛋白酶系统 尼古丁 鱼藤酮 帕金森病
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学研究
• 页码范围: 132-135,138
• 页数: 5页
• 分类号: R742.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201401030

摘要

目的 建立一种动态检测泛素-蛋白酶系统(UPS)活性的新方法,并利用此方法观察尼古丁对鱼藤酮诱导的UPS功能障碍的影响.方法 合成UPS降解信号CL1,将其与含有绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-C1连接,构建CL1-pEGFP-C1质粒并转染PC12细胞,经G418筛选后得到稳定表达的CL1-pEGFP-C1细胞系.蛋白酶抑制剂MG132、鱼藤酮或尼古丁+鱼藤酮处理细胞,应用免疫印迹技术检测细胞内GFP含量的变化,荧光显微镜观察细胞荧光强度的变化.结果 稳定转染的CL1-pEGFP-C1细胞无绿色荧光,而MG132处理后细胞内绿色荧光显著增加,且随MG132浓度增加荧光强度逐渐增加,GFP表达逐渐增高(P<0.05).鱼藤酮处理后细胞内绿色荧光显著增加,GFP含量明显高于非处理组(P<0.05).低浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度显著降低,GFP蛋白表达显著减少,高浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度降低更加显著,GFP蛋白表达减少更明显(P<0.05).结论 成功建立了能够在活细胞中全面、动态检测UPS活性的方法.鱼藤酮可降低UPS活性,尼古丁可减轻鱼藤酮引起的UPS功能障碍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈秋民	西安交通大学医学院第一附属医院神经内科	107	549	12.0	18.0
2	邓永宁	西安交通大学医学院第一附属医院神经内科	10	15	2.0	3.0
3	石婕	西安交通大学医学院第一附属医院神经内科	5	7	2.0	2.0
4	刘洁	西安交通大学医学院第一附属医院神经内科	38	108	5.0	8.0