利用HLA-B*1301转基因小鼠探讨三氯乙烯诱导迟发型超敏反应效应

• 作者: 孟涛 张峻 戴宇飞 纪玉青 贾强 赵雪铮 郑玉新
• 来源期刊: 中国职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 三氯乙烯 三氯乙醇 迟发型超敏反应 转基因小鼠 动物模型 淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 481-488
• 页数: 8页
• 分类号: R135.7|R114
• 语种: 中文
• DOI: 10.11763/j.issn.2095-2619.2014.05.001

摘要

目的：利用转基因技术构建人类白细胞抗原（ HLA）-B*1301转基因小鼠，探讨三氯乙烯诱导迟发型超敏反应效应。方法以无特定病原体级C57BL/6雌性小鼠为实验动物。采用显微注射法构建HLA-B*1301转基因小鼠，流式细胞仪检测其脾淋巴细胞HLA-B*1301蛋白表达。野生型和转基因小鼠各16只，均设1周、2周TCE组和1周、2周对照组，每组4只，TCE组以腹腔注射联合皮肤涂抹的方式进行TCE染毒，对照组予橄榄油处理。染毒结束后，采用流式微球分析法检测各组小鼠周围血血清细胞因子表达水平，观察小鼠皮肤和肝脏病理变化，并分离小鼠脾淋巴细胞，分别予终浓度为13.14、29.88和5.00 mg/L的TCE、三氯乙醇（ TCOH）和刀豆蛋白A（ ConA）处理后采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷掺入法测定脾淋巴细胞增殖水平。结果构建的转基因小鼠可正常表达HLA-B*1301蛋白。白细胞介素（IL）-6表达水平在小鼠类型、染毒处理和染毒时间之间存在交互效应（P<0.01）。IL-4表达水平在小鼠类型和染毒处理之间存在交互效应（ P<0.05）。野生型小鼠和转基因小鼠的1周、2周TCE组IL-6表达水平分别高于同类型小鼠的1周、2周对照组[（9.78±3.18）vs（3.40±0.26）ng/L，（12.59±4.79）vs （3.56±1.68）ng/L；（10.41±3.08）vs（2.70±0.49）ng/L，（4.04±0.82）vs（2.96±1.12）ng/L；P<0.01]；转基因小鼠的1周和2周TCE组IL-4表达水平分别低于同类型小鼠的1周和2周对照组[（3.87±0.42）vs（5.33±1.69）ng/L，（3.45±0.35）vs（4.44±0.33）ng/L，P<0.05，P<0.01]。转基因小鼠2周TCE组IL-6和IL-4表达水平均低于野生型小鼠的2周TCE组[（4.04±0.82）vs（10.41±3.08）ng/L（，3.45±0.35）vs（4.90±0.71）ng/L， P<0.01]，并低于转基因小鼠的1周TCE组[（4.04±0.82）vs（12.59±4.79）ng/L，（3.45±0.35）vs（3.87±0.42）ng/L，P<0.01]。ConA处理后，脾淋巴细胞增殖水平在小鼠类型、染毒处理和染毒时间之间存在交互效应（P<0.05）；分别经TCE和TCOH处理后，脾淋巴细胞增殖水平在小鼠类型、染毒处理和染毒时间的主效应和交互效应上均无统计学意义（ P>0.05）。连续在体TCE染毒2周后，4只野生型小鼠中有1只皮肤出现轻微病理学改变；4只转基因小鼠中有1只出现背部皮肤组织和肝脏组织病理改变，均较野生型小鼠明显。结论首次构建了HLA-B*1301转基因小鼠，并且能正常表达HLA-B*1301蛋白。转基因小鼠对TCE的免疫毒性作用较野生型小鼠更敏感，经在体连续TCE染毒后，其机体免疫功能呈现先增强后抑制的现象。