基于颜色判定的环介导等温扩增方法检测EV71

• 作者: 何书 刘峰涛 戴颖 汪奇伟
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录-环介导等温扩增技术 肠道病毒71型 手足口病
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 151-154
• 页数: 4页
• 分类号: R511
• 语种: 中文

摘要

建立了一种基于颜色判定的灵敏、快速和经济的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于肠道病毒71 (enterovirus 71,EV71)基因检测.针对EV71病毒VP1基因特异性序列的设计出6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60 min.在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准.进行特异性／灵敏度分析,同时与RT-PCR方法进行比较,并对93份疑似患者中咽拭子的病毒核酸进行了检测.通过颜色变化能观察到LAMP扩增产物的存在,且与柯萨奇病毒A16型(CA16)、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应发生.所建立的RT-LAMP检测方法灵敏,灵敏度为500 copy/tube,与定量PCR灵敏度相同.93份咽拭子标本中,RT-LAMP检测为46份阳性,荧光定量PCR检测有为44份阳性,二者统计学无显著差异.RT-LAMP是一种快速、敏感、特异、经济的方法,适合用于基层医疗机构临床检测.