RNAi沉默CXCR7对人结肠癌细胞SW620特异性靶向抑制的实验研究

• 作者: 孙飞 王鑫 陆航 陈玲
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 结直肠癌 CXCR7 CXCL12 重组慢病毒载体 RNAi
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 14-20
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140203

摘要

目的:探讨慢病毒介导的CXCR7-shRNA转染人结肠癌细胞株SW620后对CXCR7蛋白表达的影响.方法:(1)设计并合成CXCR7的3对shRNA序列及1对阴性对照序列,与pSilencerTM4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK293T细胞包装病毒并检测滴度;(2)将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人结肠癌细胞SW620,RT-PCR检测CXCR7mRNA的表达情况,测定沉默效率,筛选沉默效率最高的一组CXCR7-shRNA作为后续实验表达载体;(3)MTT法检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞生长增殖的影响;(4)通过细胞划痕实验检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞侵袭迁移能力的影响;(5) Western blot检测转染CXCR7-shRNA对SW620细胞蛋白表达情况.结果:(1)测序证实3对慢病毒载体及1对阴性对照载体均包装成功,滴度分别为3.16×108TU/ml、4.27×108TU/ml、3.93×108TU/ml和2.95×108TU/ml;(2)3组慢病毒载体转染SW620细胞后,CXCR7 mRNA的表达量均较阴性对照组明显降低(P＜0.05),其中CXCR7-shRNA-1对CXCR7的抑制率明显高于其他两组(P＜0.05);(3)CXCR7-shRNA-1转染SW620后,肿瘤细胞的增殖程度显著减少,与空白组相比有显著性差异(P＜0.05);(4)SW620细胞在划痕24h后,空白对照组和实验组的细胞迁移指数(MI)分别为(49.92±6.41)％和(29.13±5.38)％,有统计学意义(P＜0.05),划痕48h后,对照组与实验组的MI分别为(96.52±7.44)％和(72.03±8.29)％,有统计学意义(P＜0.05);(5)CXCR7-shRNA-1转染SW620细胞后,与空病毒载体组、空白组相比,CXCR7蛋白表达量明显降低,具有统计学意义(P＜0.05).结论:CXCR7-shRNA慢病毒表达载体转染SW620细胞后可有效下调CXCR7mRNA和蛋白的表达水平并能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移,为下一步研究以CXCR7/CXCL12生物学轴为靶点的结直肠癌慢病毒基因沉默治疗打下了良好的基础,为结直肠癌的基因治疗提供了新方向.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆航		11	41	4.0	5.0
2	陈玲		16	69	4.0	8.0
3	王鑫		8	29	3.0	5.0
4	孙飞		4	9	2.0	3.0