小鼠高迁移率族蛋白B1启动子的构建与转录活性检测

• 作者: 余曜 周健洪 张赛霞 李伊为 李菲 杜少辉 温泉 田瑞敏 白晔 邓汝东 陈东风 雷航 黎晖
• 来源期刊: 广州中医药大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 高迁移率族蛋白B1 启动子 荧光素酶 报告基因
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 810-813,820
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 2680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2014.05.028

摘要

【目的】构建小鼠高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box 1 protein， HMGB1）启动子全长序列的荧光素酶报告基因用于药物筛选。【方法】采用PCR 技术扩增小鼠HMGB1基因启动子全长序列，用GV238载体构建报告质粒GV238-HMGB1-P-Luc，以pGL3-basic作为阴性对照质粒，与内参质粒pRL共转染Hela细胞，以内毒素（LPS,0.2μg/mL）作为激活剂，以正丁酸钠（SB，10 mmol/L）作为抑制剂，分组处理24 h后检测荧光素酶活性。【结果】经酶切、 PCR及测序鉴定证实克隆的HMGB1基因启动子全长2140 bp， DNA序列正确无突变。与pGL3-basic组比较， GV238-HMGB1-P-Luc 组荧光素酶活性显著增强（P<0.05）；与GV238-HMGB1-P-Luc组比较， LPS组荧光素酶活性显著增强（P<0.01）；与LPS组比较， SB组荧光素酶活性显著降低（P<0.01）。【结论】 HMGB1基因启动子报告基因构建成功， LPS可以增强其表达， SB则可以抑制LPS刺激下的HMGB1启动子表达增强，可为下一步筛选具有调控HMGB1启动子活性的药物奠定基础。