E2F1对TFDP3表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

• 作者: 刁艳君 岳乔红 李蕊 杨静 辛艺娟 郝晓柯 马越云
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: E2F1 转录因子二聚化配体3 双荧光素酶报告基因 启动子 前列腺癌 PC3细胞
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 125-129
• 分类号: R737.25|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.02.002

摘要

目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响.方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞,测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用,Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响,流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响.结果:成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后,TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高[(1.14 ±0.06)vs(0.61 ±0.05),P＜0.05].转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍[(0.24 ±0.03)vs(0.09 ±0.02),P＜0.05].pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升[(7.10±0.003)％ vs(2.66±0.001)％,P＜0.05],而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降[(4.92±0.002)％ vs(7.10±0.003)％,P＜0.05].结论:E2F1可增强TFDP3启动子的活性,增加TFDP3蛋白的表达,其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡.