白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达

• 作者: 刘鉴 吴家红 孙宇 程金芝 陈璐
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 丝氨酸蛋白酶抑制剂 可变剪接子 克隆表达 白纹伊蚊
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 473-478
• 页数: 6页
• 分类号: R384
• 字数: 4119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.05.009

摘要

目的 克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1).方法 根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析.将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达.利用实时荧光定量RT-PCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异.结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260 bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332 bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95％和90％.两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上.以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒.SDS-PAGE结果显示目的基因在Ori-gami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000 Da,经亲和层析获得目的蛋白.组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P＞0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P＜0.05).结论 白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘鉴	贵阳医学院寄生虫教研室	8	12	2.0	2.0
2	吴家红	贵阳医学院寄生虫教研室	26	116	7.0	9.0
3	程金芝	贵阳医学院寄生虫教研室	7	32	3.0	5.0
7	孙宇		5	32	3.0	5.0
8	陈璐		13	122	7.0	11.0