重组人表皮生长因子在毕赤酵母中的表达纯化及鉴定

• 作者: 周卫东 庄露 廖小金 肖清江 陈清西
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 表皮生长因子(EGF) 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 855-859
• 页数: 5页
• 分类号: Q356.1
• 字数: 4505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.2014.06.020

摘要

构建并筛选出重组人表皮生长因子(rhEGF)高表达的毕赤酵母(Pichia pastoris)基因工程菌株,于30 L发酵罐进行中试发酵按1∶15接种15 L FBSM发酵,pH 6.0、28～30℃、DO 20％～30％、流加甲醇诱导发酵42 h,rhEGF的表达量可达1 g/L.采用疏水层析、离子交换柱层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化rhEGF,获得的rhEGF试制品的纯度大于95％,得率在40％以上.通过基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhEGF的分子质量为5 946.309 u,与理论分子质量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,测序结果与理论的氨基酸序列一致.采用Balb/c 3T3细胞增殖/MTT比色法测定其活性,测定rhEGF的活性为1.0×106 IU/mg,与WHO标准品相当.本研究实现了毕赤酵母高效表达rhEGF并纯化得到符合《中国药典》标准的rhEGF,为工业化生产rhEGF提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈清西	厦门大学生命科学学院	114	2033	24.0	40.0
2	廖小金	厦门大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
3	肖清江		2	2	1.0	1.0
4	庄露		1	2	1.0	1.0
5	周卫东		2	2	1.0	1.0