肺炎链球菌中青霉素结合蛋白PBP3在大肠杆菌中的可溶性表达及活性鉴定

• 作者: 侯粲 周宇 李爽跃 杨曙明 王长振
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 肺炎链球菌 PBP3 可溶性表达 纯化 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 327-333
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130192

摘要

[目的]克隆肺炎链球菌R6的pbp3基因,构建原核表达载体并转化大肠杆菌表达,为PBP3的结构及应用研究创造条件.[方法]利用PCR法克隆肺炎链球菌R6中N端截短的pbp3基因(15-413 aa),BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后插入pGEX-6p-1构建pGEX-6p-pbp3*表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中胞内表达GST-PBP3融合蛋白,Glutathione-Sepharose 4B column亲和纯化GST-PBP3融合蛋白,PreScission Protease切除GST标签,再次过谷胱甘肽亲和层析柱获得纯化的PBP3蛋白.利用PBP3对头孢喹诺的结合试验来鉴定表达蛋白是否有活性.[结果]经测序鉴定成功扩增出N端截短的pbp3基因,成功构建了pGEX-6p-pbp3*表达载体,并纯化出可溶性PBP3蛋白,而且有活性.[结论]肺炎链球菌pbp3基因原核表达系统的成功构建以及有活性重组蛋白的获得,为PBP3蛋白的结构及应用研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长振	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	27	156	7.0	11.0
2	杨曙明	中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所	73	658	15.0	22.0
3	侯粲	中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所	9	14	2.0	3.0
4	周宇	中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所	13	25	3.0	4.0
5	李爽跃	中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所	6	12	2.0	3.0