人细小病毒B19 VP1u多克隆抗体的制备及其保守区外N端氨基酸对sPLA2活性影响的初步研究

• 作者: 易千慧 李毅 王媛 董衍明 赵丹
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 人细小病毒B19 VP1u 多克隆抗体 磷脂酶A2
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 医学微生物
• 页码范围: 319-326
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130209

摘要

[目的]制备人细小病毒B19-VP1u的多克隆抗体,探究VP1u多克隆抗体及其保守区外N端氨基酸对病毒磷脂酶A2活性的影响.[方法]首先通过分子克隆方法构建相应原核表达载体;利用原核表达系统纯化含MBP标签的VP1u全长及N端系列截短突变融合蛋白;接着免疫新西兰大白兔制备全长VP1u蛋白的多克隆抗体;最后利用磷脂酶A2活性检测试剂盒检测了纯化蛋白的磷脂酶A2活性.[结果]Western blot及免疫荧光实验证实制备的多克隆抗体具有较高的特异性;磷脂酶A2活性检测发现全长VP1u-MBP融合蛋白具有一定的活性,该活性可以被VP1u的抗体抑制;N端保守区外截短系列蛋白的酶活检测发现,N端截掉12个氨基酸时酶活降低53％,截掉67个氨基酸时酶活性几乎完全丧失.[结论]首次发现VP1u保守区外N端氨基酸,尤其是第12个氨基酸前的区域以及第22-67个氨基酸之间的区域,对sPLA2活性的保持具有重要意义,推测该区域可能对维持正常的蛋白构象起重要的作用;而其特异性多克隆抗体的制备也为进一步研究B19病毒VP1u在病毒复制周期的作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李毅	华中师范大学生命科学学院昆虫所	13	23	3.0	4.0
3	赵丹	华中师范大学生命科学学院昆虫所	39	140	6.0	11.0
4	王媛	华中师范大学生命科学学院昆虫所	19	336	11.0	18.0
5	董衍明	华中师范大学生命科学学院昆虫所	6	22	3.0	4.0
6	易千慧	华中师范大学生命科学学院昆虫所	1	1	1.0	1.0