猴细小病毒Vp2的克隆、表达和鉴定

• 作者: Kevin E Brown 刘正稳 楚雍烈
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 猴细小病毒 基因克隆 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 111-113,117
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2004.02.003

摘要

目的克隆、表达和鉴定猴细小病毒(simian parvovirus,SPV)Vp2蛋白.方法用设计的SPV Vp2区的特异性引物,PCR法扩增SPV Vp2基因DNA片断;将获得的基因片断插入pThioHis A载体中,转化大肠杆菌DH5a后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶酶切和核酸序列分析技术鉴定重组质粒;以LB培养液培养转化有插入SPV Vp2基因的pThioHis A载体的大肠杆菌,以终浓度1 mmol·L-1的IPTG诱导蛋白的表达;用SDA-PAGE和Westernblot分析和鉴定表达的蛋白.结果经限制性内切酶酶切和核酸序列分析,获得了插入pThioHis A载体框架的SPVVp2基因的表达质粒;阳性转化大肠杆菌在IPTG诱导下获得了SPV Vp2蛋白的表达;SDA-PAGE和用抗-Thio及抗-SPV Vp2的特异性抗体的Western blot分析证实了表达蛋白的特异性.结论获得了SPV Vp2基因的表达质粒并在大肠杆菌中得了高效表达,为进一步建立SPV感染的检测方法和研究SPV的血清流行病学等奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	楚雍烈	西安交通大学医学院微生物学教研室	76	311	10.0	13.0
2	刘正稳	安交通大学第一医院传染科	1	0	0.0	0.0