荧光标记DNA分子量内标的设计与制备

• 作者: 叶健 杨翩 梁景青 王邦义 赵兴春
• 来源期刊: 生命科学仪器
• 关键词: 荧光标记 pMD-18T Vector PCR 分子量内标
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与应用
• 页码范围: 56-58
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

目的:设计并制备65bp-500bp范围的荧光标记DNA分子量内标.方法:pMD18-T Vector连接任意一段割胶回收的DNA片段,克隆后提取重组质粒经双酶切后作为模板,在其上游设计一条固定引物并用荧光标记,在其下游设计一系列引物,经PCR扩增后在ABI 3100遗传分析仪上检测.结果:扩增产物DNA片段大小分别为65bp、105bp、149bp、200bp、241bp、269bp、311bp、345bp、400bp、450bp、500bp,与预期片段大小一致.结论:11个片段经混合调平后,峰型良好,出峰位置均匀,可用于毛细管电泳中DNA片段大小的确定.