脑心肌炎病毒3C蛋白抑制IFN-β信号通路的研究

• 作者: 姜平 杜以军 白娟 闭璟珊
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 脑心肌炎病毒(EMCV) 3C蛋白 Ⅰ型干扰素
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 88-92
• 分类号: S852.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2014.03.013

摘要

为了探讨脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白3C对IFN-β信号通路的影响,采用RT-PCR方法构建EMCV 3C蛋白的重组真核表达质粒pVAX1-3C,将其转染至HeLa细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot验证其在真核细胞内的表达和分布定位情况;利用Real-time PCR方法检测HeLa细胞表达EMCV 3C蛋白后Ⅰ型干扰素(IFN)效应因子的相对表达量,并用含有双荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体检测分析3C蛋白在Ⅰ型IFN信号通路中的作用.结果表明:成功构建pVAX1-3C真核表达质粒,该重组质粒能在HeLa细胞内表达,并分布在细胞核中;pVAX1-3C重组质粒转染组细胞中Ⅰ型IFN效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS、PKR的相对表达量明显低于阴性对照;在双荧光素酶试验中,用poly(I∶C)刺激各处理组后进行检测,转染了pVAX1-3C的细胞中IFN-β、IRF3及PRDⅡ启动子驱动的荧光素酶的表达量明显低于阴性对照;ISRE启动子驱动的荧光素酶结果显示,用IFN-β刺激后,与阴性对照组相比,转染pVAX1-3C的细胞中ISRE启动子的活性受到抑制.结论:EMCV 3C蛋白能够下调细胞Ⅰ型IFN效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS、PKR的mRNA水平,并能下调IFN-β、IRF3、PRDⅡ及ISRE启动子的活性,首次证明EMCV 3C蛋白能够抑制IFN-β信号通路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜平	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	186	1921	25.0	35.0
2	白娟	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	37	73	5.0	7.0
3	闭璟珊	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	2	4	2.0	2.0