转基因抗虫玉米的定量检测

• 作者: 孙红炜 张广远 李凡 杨淑珂 路兴波
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 转基因抗虫玉米 SYBR GreenⅠ Taqman real-time PCR
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 农学—研究报告
• 页码范围: 101-107
• 分类号: S513
• 语种: 中文

摘要

建立高效、快速、准确的抗虫转基因玉米MIR162转化体特异性实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法.采用SYBR GreenⅠ和Taqman探针2种定量方法对抗虫转基因玉米MIR162进行了检测研究.SYBR GreenⅠ法MIR162转化体特异性片段和内标基因zSSⅡb的熔解曲线均表现为单一峰,扩增特异性强;二者的扩增效率均在90％～100％之间,标准曲线相关系数R2均大于0.998.2种定量方法的检测限(LOD)均为24个拷贝,定量限(LOQ)为48个拷贝,灵敏度较高.重复测试结果表明,SYBR Green Ⅰ法的标准偏差(SD)变化范围为0.05～0.13,相对标准偏差(RSD)范围为0.17％～0.40％,Taqman探针法的SD变化范围为0.03～0.14,RSD范围为0.11％～0.44％,说明2种定量检测方法具有良好的重复性和精密度.对MIR162含量为3％、1％和0.5％的混合样品的定量结果为:3.13％、1.09％、0.53％(SYBR Green Ⅰ法)和3.07％、1.02％、0.50％(Taqman探针法),RSD均小于10％,T检验分析表明2种定量方法定值结果差异不显著.本研究建立的2种实时荧光定量PCR均可有效对转基因玉米MIR162进行定量检测,可根据不同实际需求及实验室条件进行选择相应的检测方法.