根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立

• 作者: 何佳昱 徐进 朱杰华 杨志辉 赵冬梅
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 致病疫霉 根癌农杆菌介导的转化 T DNA 转化效率
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 83-87
• 页数: 5页
• 分类号: S436.31
• 字数: 5383字
• 语种: 中文

摘要

为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系，以菌株 HK0919为材料，从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果，建立的转化体系条件为：以1．0μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选，采用玻璃纸作为共培养介质，AS浓度为200μmol/L，培养6 d，温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50～60个转化子。随机选取10个转化子，利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增，转化子均能扩增出800 bp左右的预期条带；同时，利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行 PCR扩增，排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性；转化子继代培养5代后，仍能在含潮霉素 B的黑麦培养基上生长。说明外源T DNA已成功整合到致病疫霉基因组中，并能稳定遗传。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱杰华	河北农业大学植物保护学院	90	810	17.0	24.0
2	杨志辉	河北农业大学植物保护学院	61	505	13.0	19.0
3	赵冬梅	河北农业大学植物保护学院	22	48	4.0	5.0
4	何佳昱	河北农业大学植物保护学院	3	7	2.0	2.0
5	徐进	河北农业大学植物保护学院	9	29	3.0	4.0