转录介导扩增技术检测慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA及与RT-PCR的比较

• 作者: 刘洪波 刘菲 吴大先 戴立忠 谭德明
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: 转录介导的扩增技术 丙型肝炎 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 丙型肝炎病毒核糖核酸
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 页码范围: 664-672
• 页数: 9页
• 字数: 4691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2014.07.003

摘要

目的：利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification，TMA)扩增HCV RNA，并与实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)进行比较，探讨TMA系统的稳定性及其与RT-PCR的灵敏性差异和相关性，以及TMA临床应用的意义。方法：利用鼠白血病反转录酶(moloney murine leukemia virus，MMLV)、T7 RNA聚合酶及2条特异性引物等建立TMA扩增体系；通过HCV RNA的扩增曲线的相关性变化，评价不同储存温度对TMA扩增体系的稳定性和重复性的影响；通过扩增一组10倍梯度稀释的HCV RNA体外转录样本，评价TMA体系与RT-PCR的灵敏性差异。收集101份临床诊断为慢性丙型肝炎患者的血清，同时采用TMA试剂和RT-PCR试剂进行检测，比较两种方法的阳性检出率，并利用直线相关和回归探讨两种方法检测血清HCV RNA的相关性。结果：成功地建立了TMA扩增体系，该体系在室温下放置24 h，结果影响较大，但在4℃储存6 d，-20℃下储存6个月内扩增效果不受影响，稳定性良好。与湖南圣湘生物技术公司RT-PCR试剂检测结果的比较显示：31份血清标本TMA及RT-PCR均检测到阳性20例，阴性11例，检测一致率为100%。选取其中20例阳性标本进行定量分析，发现两种技术有很好的相关性(r=0.91，P<0.01)。与上海科华公司的RT-PCR试剂检测结果比较，发现在70份血清标本中，TMA检出RNA阳性标本数为34例，阴性标本数为36例，PCR检出RNA阳性标本数为32例，阴性标本数为38例，检测一致率为97.1%，两种检测方法阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。对其中29例PCR检测和TMA检测均有定量结果的血清进行分析，两种技术也有很好的相关性(r=0.96，P<0.01)。结论：TMA检测试剂在-20℃下储存，6个月内稳定性和重复性良好。TMA与RT-PCR均能很好地检出血清中HCV RNA，两种技术有很好的相关性，定量检测有很好的可比性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴立忠		4	12	1.0	3.0
2	刘洪波		1	12	1.0	1.0