人源CD137L基因在不同表达系统中表达效率的比较

• 作者: 何东洋 王淑珍 陈依军 马超 高振月
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 毕赤酵母 枯草杆菌 大肠杆菌 CD137L T细胞增殖
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 178-183
• 语种: 中文

摘要

比较分析人源CD137L在毕赤酵母、枯草杆菌及大肠杆菌中的表达差异,建立适合CD137L的表达系统并检测CD137L的生物学活性.设计PCR引物,以酵母表达质粒pPIC9K-CD 137L为模板,扩增CD137L片段,分别构建枯草杆菌表达质粒及大肠杆菌表达质粒,再转化至相应的宿主菌并筛选阳性转化子;SDS PAGE电泳分析CD137L的表达情况并比较差异;稀释复性法复性CD137L包涵体,用离子交换层析纯化CD137L;T细胞激活试验检测CD137L的活性.CD137L在3个表达系统中均可以表达并且得到质谱鉴定,但是在毕赤酵母、枯草杆菌中的表达量微弱,而在大肠杆菌中CD137L以包涵体形式高效表达,平均1L培养液能得到0.8 g包涵体沉淀,200 mg变性蛋白.经复性纯化后得到的CD137L能有效激活T细胞增殖并且其刺激活性呈现浓度依赖效应.与毕赤酵母、枯草杆菌相比,大肠杆菌表达系统能高效表达CD137L蛋白,并且经稀释复性后CD137L保持了刺激小鼠T细胞增殖的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈依军	中国药科大学生命科学与技术学院	26	88	4.0	9.0
2	王淑珍	中国药科大学生命科学与技术学院	12	5	2.0	2.0
3	何东洋	中国药科大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
4	马超	中国药科大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
5	高振月	中国药科大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0