间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素

• 作者: 仲建峰 何鑫 刘媛 刘贤金 张存政 张霄 徐重新 杨晶祎 陆梦晓
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Cry1C毒素 多克隆抗体 稻米 时间分辨荧光免疫分析
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 44-48
• 分类号: Q936
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2014.06.007

摘要

利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测.通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验.结果表明:获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074 ng·mL-1,中抑制浓度(IC50)为60.16 ng·mL-1,线性检测范围(IC20 ～ IC80)为0.96～1 633.60 ng· mL-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53％～107.12％,变异系数为6.05％ ～ 11.24％.结论:该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求.