摘要:
目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)和Ⅱ氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)单独及联合染毒引致青春前期雄性大鼠性腺发育不良的作用机制.方法 SPF级3周龄雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(玉米油)、DEHP单独染毒组(500 mg/kg)、CYP单独染毒组(80 mg/kg)及联合染毒组(DEH 500 mg/kg+CYP 80 mg/kg),各组10只,每天灌胃1次,连续30d.于末次染毒24 h后处死动物,测定大鼠体重及睾丸湿重,并计算睾丸系数;放射免疫法测定血清睾酮水平;电子显微镜观察睾丸生殖细胞超微结构变化;实时荧光定量PCR法测定卵泡刺激素受体(FSHR)、雄激素结合蛋白(ABP)、抑制素B(INH B)、波形蛋白(VIM)的基因表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定FSHR、ABP、INH B及VIM的蛋白表达水平,利用2×2析因方差分析,对比各组间的差异,通过交互图判断DEHP与CYP的交互作用.结果 与对照组比较,DEHP、CYP单独及联合染毒组睾丸重量分别下降39.3%~59.2%,睾丸系数分别下降19.7%~58.6%,血清睾酮水平均分别显著下降49.1%~62.7%,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).各染毒组睾丸生殖细胞超微结构均可见不同程度的病变.与对照组比较,DEHP单独染毒组FSHR、ABP、INH B、VIM mRNA表达水平分别下调1.72,2.64,2.83及1.79倍,蛋白表达分别下调65.2%,53.7%,70.1%及51.9%,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);CYP单独染毒组ABP、INH B的mRNA表达水平分别下调1.72及2.06倍,蛋白表达分别下调38.3%及49.7%,差异有统计学意义(P<0.05);联合染毒组FSHR、ABP、INH B及VIM的mRNA表达水平分别下调1.62、2.00、2.35及1.54倍,FSHR,INH B及VIM蛋白表达分别下调52.1%,53.9%及58.8%,差异均有统计学意义(P<0.05).经2×2析因方差分析,DEHP、CYP联合染毒对ABP、INH的交互作用有统计学意义(P<0.05),交互作用呈拮抗效应.结论 DEHP、CYP单独及联合染毒均可致青春前期大鼠性腺发育不良,二者均可不同程度的干扰睾丸支持细胞功能相关的基因与蛋白的表达,联合染毒呈一定拮抗作用,两者相比,以DEHP的生殖毒性更强.