芽胞外壁基质组成蛋白的编码基因启动子PexsY指导的cry1Ac基因表达

• 作者: 宋福平 张喆 张杰 彭琦 曲宁 王冠男 郑庆云 高继国
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 PexsY启动子 Cry1Ac蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 1138-1145
• 分类号: Q933
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.10.005

摘要

[目的]利用非cry基因启动子PexsY(芽胞外壁基质组成蛋白编码基因启动子)表达Cry1Ac晶体蛋白,发现可用于cry基因表达的新元件,为高效工程菌的构建奠定基础.[方法]采用启动子融合lacZ技术,通过β-半乳糖苷酶活性分析了PexsY启动子和截短的Pexsy启动子的转录活性;利用该启动子在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD73菌株中表达了cry1 Ac基因,通过透射电子显微镜观察晶体形态;蛋白定量、SDS-PAGE比较蛋白产量;生物活性测定进行功能验证.[结果]PexsY启动子在芽胞晚期转录活性很高,透射电镜观察到利用该启动子表达的cry1 Ac基因形成了菱形晶体,SDS-PAGE分析可以检测到133kDa的Cry1Ac蛋白,且与cry3A启动子指导表达的蛋白产量相近,少于cry8E启动子指导表达的蛋白产量;生物活性测定表明PexsY指导表达Cry1Ac蛋白对玉米螟(Ostrinia furnacalis)具有杀虫活性.[结论]在Bt无晶体突变体中,非cry基因启动子PexsY可以正常表达133kDa的Cry1Ac蛋白,并形成晶体,具有在芽胞形成晚期表达cry基因的能力,该类启动子将在Bt工程菌构建中发挥重要作用.