低氧对小鼠视网膜神经节细胞-5中根蛋白表达的影响

• 作者: 徐海峰 杨侠 王龙梅 董晓光 闫琳
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: 根蛋白 视网膜神经节细胞-5 缺氧 细胞活力
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 433-437
• 页数: 5页
• 字数: 5180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2014.0118

摘要

目的 观察低氧对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)-5中根蛋白(radixin,RDX)表达的影响,探讨低氧损伤中RGC的损伤机制和可能的保护途径.方法 常规培养RGC-5,用RGC特异表面标记性抗原Thy-1鉴定;CoCl2法建立低氧模型,以含终浓度为100 μmol·L-1CoCl2培养基培养RGC-5 3 h、6h、12 h、24h、48 h,采用Real-time RT-PCR和Western blot检测RDX mRNA及其蛋白在RGC-5中的表达情况,采用免疫荧光观察RDX在RGC-5细胞中的表达及定位.结果 体外培养的RGC-5呈梭形或多边形,特异性表面标记性抗原Thy-1反应阳性.Real-time RT-PCR结果显示,低氧组RDX mRNA表达呈进行性增强,于低氧6h达到高峰后开始下降;正常对照组RDX mRNA的相对表达量为1.00±0.11,低氧3h、6h、12 h、24h、48 h分别为1.37±0.18、1.75±0.32、1.21±0.23、0.91±0.19、0.63±0.26,总体比较差异有统计学意义(F=813.717,P=0.000).Western blot结果 显示,不同培养条件下RGC-5细胞中RDX蛋白的总体比较差异有统计学意义(F=1.279,P=0.000).低氧3h、6h、12 h、24h组RDX/GAPDHA值均高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=55.301,P=0.000;t=139.986,P=0.000;t =37.552,P=0.000;t=4.183,P=0.014);低氧48 h组RDX/GAPDH A值(0.24±0.03)低于正常对照组(0.33±0.02),差异有统计学意义(t=38.889,P=0.000).在低氧组内不同时间点比较,RDX/GAPDHA值随时间的延长呈逐渐上升趋势,于低氧6h达高峰,然后开始下降,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光观察发现RDX蛋白阳性表达在RGC-5细胞中,与正常对照组相比,低氧组RDX的表达先增强(6h)后减弱.结论 低氧条件下小鼠RGC-5细胞中RDX表达水平先升高后降低,可能与视网膜新生血管疾病中RGC凋亡相关.