Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

• 作者: 夏虹 林明侠 沈宁江 蔡文涛
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤 Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶 bcl-2 相关 x蛋白质 细胞色素C 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 782-789
• 页数: 8页
• 分类号: R738.1
• 字数: 5165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140418

摘要

目的：研究骨肉瘤 MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用，探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA，建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型，分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照 siRNA缺氧组（转染对照 siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤 MG-63细胞在缺氧培养不同时间（6、12、24、48和72 h）后 Bax和 Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测 TG2活性， RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平，免疫组织化学法检测TG2和 Bax蛋白在细胞内的分布， Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较，单纯缺氧组和对照 siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强（P＜0.01），并随缺氧时间延长逐渐升高（P＜0.01）；Bax mRNA表达水平变化不明显（P＞0.05），但 Bax蛋白表达水平明显下降（P＜0.01），细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）。与单纯缺氧组和对照 siRNA缺氧组比较，TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点 TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.01），Bax mRNA表达水平无明显变化（P＞0.05），Bax蛋白表达明显增加（P＜0.01），胞浆内 Cyt C蛋白水平明显增加（P＜0.01），线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P＜0.01），细胞凋亡率显著增加（P＜0.01）。结论：TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax，阻止Cyt C释放至胞浆，从而抑制肿瘤细胞凋亡。