一种功能性分离和纯化胶质瘤干细胞的方法

• 作者: 刘天助 刘彦廷 宁瑜 廖奕宏 廖红展 徐宁波 汪鑫 邱胜聪 钟文宏
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质瘤干细胞 缺氧 分离 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 865-869
• 页数: 5页
• 分类号: R730.264
• 字数: 3675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2014.09.001

摘要

目的 探索一种简单、高效、稳定、可靠、经济的胶质瘤干细胞分离和纯化方法. 方法 取对数生长期U87细胞,应用无血清干细胞培养基,置含1％O2的缺氧培养箱中培养,10d后传代培养并离心收集第一代肿瘤球(G1),连续传代培养获得第5代肿瘤球(G5).免疫组化染色检测G5肿瘤球中巢蛋白(nestin)、CD133和缺氧诱导因子2α (HIF2α)的表达;Western blotting检测G1～G5肿瘤球中HIF2α蛋白的表达;免疫细胞化学染色检测G5分化细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、O1及βⅢ微管蛋白(βⅢ-Tublin)的表达.6只裸鼠按随机数字表法均分为实验组和对照组(每组3只),于左侧背部皮下分别注射105个/5 μL G5、U87细胞,25 d后处死裸鼠,取出肿瘤,免疫组织化学染色检测肿瘤中nestin的表达. 结果 G5肿瘤球中nestin、CD133、HIF2α阳性细胞率分别为91％±5％、95％±4％和98％±2％; Western blotting检测显示G1～G5肿瘤球中HIF2α蛋白的表达逐渐增加;G5细胞能分化为表达βⅢ-Tublin、GFAP、O1的子细胞;6只裸鼠均长出肿瘤,实验组的肿瘤体积较大,且肿瘤组织nestin阳性细胞率(47％±11％)明显高于对照组(5％±2％). 结论 使用功能性分离和纯化方法获得的G5肿瘤球细胞,表达胶质瘤干细胞的特异性标记物、具有三系分化能力和较强的体内成瘤能力,符合胶质瘤干细胞的特征.