SIRT1增强青光眼小梁网细胞DSBs修复能力及抗细胞衰老的研究

• 作者: 任朋亮 刘戟 刘明佳 杨晓龙 范雪娇 黄晶晶
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: SIRT1 青光眼小梁网细胞 氧化应激 DNA双链损伤修复 细胞衰老
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 572-577
• 语种: 中文

摘要

目的 研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1与青光眼小梁网细胞(GTM)DNA双链损伤(DSBs)修复能力及细胞衰老之间的关系.方法 首先通过RT-PCR和Western blot检测正常小梁网细胞(HTM)与GTM之间SIRT1表达的差异;然后将HTM、GTM细胞分别分为4组,白藜芦醇组(0.5μmol/L Res干预24 h)、SIRT1-ShRNA组(构建成功的SIRT1干扰质粒转染细胞)、microRNA34a组(构建成功的microRNA34a表达质粒转染细胞)以及Control组,通过Western blot检测各组细胞中SIRT1表达水平的差异;SA-β-Gal衰老染色检测连续生长10 h、32 h、3d、6d后各组细胞的衰老变化;中性彗星电泳检测经1.33 mol/L H2O2液处理0h、2h时各组细胞中DNA双链损伤情况;Western blot检测1.33 mol/L H2O2液处理0h、1h、2h后,各组细胞中DH2AX表达的变化情况.结果 HTM及GTM细胞中均存在SIRT1的表达,且HTM中的表达要高于GTM;HTM、GTM细胞各组内比较发现,SIRT1蛋白的表达水平呈Res组＞Control组＞microRNA34a组＞SIR T1-ShR NA组趋势;SA-β-Gal衰老染色则发现在相同时间点,GTM细胞的衰老程度均高于HTM细胞,而在同一类细胞中,SIRT1-ShRNA组细胞最先表现出衰老,且随着时间的延长,其衰老程度也最为严重,Res干预细胞24 h后,能明显延缓细胞衰老.中性彗星电泳检测表明经氧化剂处理后,GTM组双链DNA的损伤情况比HTM组严重,并呈现出SIRT1-ShRNA组＞microRNA34a组＞Control组＞Res组的趋势,γ-H2AX表达量的检测结果与中性彗星电泳的结果一致.结论 SIRT1表达活性的下调可能是诱发青光眼的因素之一;Res能显著增强HTM细胞中SIRT1的表达活性,上调的SIRT1能促进HTM细胞DNA双链损伤修复的能力,维持细胞基因组的稳定性,进而减缓细胞的衰老.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨晓龙	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	7	27	3.0	5.0
2	刘戟	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	33	146	7.0	9.0
3	黄晶晶	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	40	247	8.0	15.0
4	范雪娇	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	11	60	5.0	7.0
5	刘明佳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	5	16	2.0	4.0
6	任朋亮	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	4	36	3.0	4.0