紧密连接蛋白对实验性角膜新生血管发生的抑制作用

• 作者: 刘高勤 张学光 徐静 赫雪飞 陆培荣 陈志刚
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 紧密连接蛋白 新生血管 碱烧伤 角膜 动物模型 BALB/c小鼠
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 773-779
• 页数: 7页
• 字数: 7023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.09.002

摘要

背景 角膜新生血管(CNV)是导致角膜盲的主要原因之一,研究表明紧密连接蛋白中的闭锁小带蛋白1(ZO-1)对病理性新生血管的发生有调节作用,能通过紧密连接结构构成有效的生理屏障,抑制病理性新生血管的生长,但ZO-1对CNV是否发挥作用尚不清楚. 目的 探讨ZO-1在实验性CNV发生及发展中的作用及其机制.方法 将清洁级7～8周龄雄性BALB/c小鼠24只按随机数字表法随机分为碱烧伤15s组和碱烧伤40 s组,用NaOH滤纸贴附小鼠左眼中央角膜的方法构建CNV模型,于碱烧伤后2周在裂隙灯显微镜下观察并比较两组小鼠CNV生长情况,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测并比较两组小鼠角膜组织中ZO-1 mRNA的表达.另取鼠龄和性别相匹配同种小鼠54只随机分为3个组,均用NaOH滤纸贴附小鼠左眼中央角膜40 s的方法构建CNV模型,造模后分别用质量分数0.2％透明质酸钠(HA)配制的10 mg/L的ZO-1抗体和0.2％ HA配制的5 mg/L缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)重组蛋白点眼1周,每日3次.于实验后2周摘除大鼠左眼角膜,用免疫组织化学法检测CD31在CNV中的表达,鉴定CNV的形成数目和面积;采用RT-PCR法检测3个组小鼠角膜组织中血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达;采用流式细胞术检测碱烧伤角膜中巨噬细胞特异性标志物F4/80、中性粒细胞特异性标志物Ly-6G的阳性细胞比例,评价炎性细胞的浸润情况.结果 裂隙灯显微镜下可见造模后2周小鼠CNV达高峰;碱烧伤15 s组小鼠轻度、中度、重度CNV的眼数分布明显少于碱烧伤40 s组,差异有统计学意义(x2=6.032,P=O.049);碱烧伤15s组和碱烧伤40 s组小鼠角膜中ZO-1 mRNA的相对表达量分别为1.53±0.04和1.15±0.08,差异有统计学意义(t=4.157,P=0.014).免疫组织化学法检测显示,ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中CD31阳性细胞数多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-129.590、-226.820,均P=0.000),且染色面积明显大于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-5.310、-8.840,均P=0.000).ZO-1抗体干预组角膜组织内VEGFmRNA相对表达量为1.33±0.10,HIF-1α阳性对照组为1.46±0.11,均明显高于0.2％ HA组的0.93±0.06,差异均有统计学意义(t=-5.820、-7.284,均P=0.000).ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中F4/80阳性细胞比例明显多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-16.750、-17.480,均P=0.000);ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中Ly-6G阳性细胞比例明显多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-21.450、-27.680,均P=0.000). 结论 碱烧伤诱导的CNV中ZO-1表达明显下降,用抗ZO-1蛋白干预后CNV组织中VEGF mRNA表达量升高,炎性细胞浸润更明显,提示ZO-1对CNV影响的作用机制与VEGF的表达量有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学光	苏州大学附属第一医院临床免疫研究所	399	1957	18.0	24.0
2	陆培荣	苏州大学附属第一医院眼科	42	117	5.0	8.0
3	陈志刚	苏州大学附属第一医院眼科	21	91	5.0	9.0
4	刘高勤	苏州大学附属第一医院眼科	29	105	5.0	8.0
5	徐静	苏州大学附属第一医院眼科	10	13	2.0	2.0
6	赫雪飞	苏州大学附属第一医院眼科	9	20	3.0	4.0